Piesardzības pasākumi par poliakrilamīda gēla elektroforēzi

· poliakrilamīdsŽelejai ir jābūt ar akrilamīda monomēru, polimerizācijas sākuma materiālu, katalizatoru un sāls un buferšķīduma tiesības kopā.

· akrilamīdsun bis (n, n '- metilēna dubultā akrilamīds) ir monomēru formas gēla matrica.

· Amonija persulfāta sāk līmes polimerizācijas process. Līmes formulēšanai ir nepieciešams 10% amonija persulfāta šķīdums, kas sagatavots ūdenī. Lielākā daļa informācijas norādīja uz aktīvas lietošanas nepieciešamību. Tomēr 10% šķīdumu var novietot 4 ℃ vairākas nedēļas, bez ievērojamas aktivitātes zaudēšanas. Veido līdz 10 ml un izmet, kad līme nespēj apkopot.

Padoms: procentuālais daudzumsakrilamīdsSekvencēšanas līme un olbaltumvielu līme nav vienāda. Ja izmantojat iepriekš sagatavotu akrilamīdu: bis risinājumu, noteikti iegūstiet pareizo pudeli.

· Temed (n, n, n ', n'- tetrametilēnēndiamīns) ir katalizators brūnā pudelē, kas ievietots ledusskapī. Pievienojiet tieši pirms līmes ieliešanas.

· Poliakrilamīda elektroforēzes stikls elektroforēzē jāmazgā pirms un pēc katras reizes. Pēc elektroforēzes mazgājiet ar mīkstu suku un audumu karstā ziepjūdenī, izskalojiet ar destilētu ūdeni un stāviet nožūt.

· Mitrums un putekļi var izraisīt dobu polimēru. Pirms elektroforēzes notīriet stikla plāksni ar stikla tīrītāju un noslaukiet to ar mīkstu suku. Nomazgājiet ar destilētu ūdeni un kārtīgi nosusiniet ar papīra salveti. Ieskalošana ar 70% etanola pirms noslaukšanas ar papīru palīdz tīrīt un paātrināt žāvēšanu. Pievienojiet akrilamīda paraugus secīgi: bis, ūdens, bufera šķīdums, amonija persulfāts, temed. Labi sakrata un nekavējoties ielej.

Pirms polimerizācijas nav nepieciešams degass poliakrilamīds. (Akrilamīds kādreiz tika ievietots vakuumā, lai noņemtu burbuļus, jo skābeklis kavē polimerizāciju.)

Horizontālā līmes punkta parauga padomi.

· Ielieciet melna papīra gabalu apakšējā kastē, melns fons, lai izveidotu kādu parauga caurumu, lai redzētu skaidrāk.
· Līmējiet tvertni piepildīts buferis, tieši virs koloīda.
· Ja malai ir gaisma, ieslēdziet gaismas, ļaujiet gaismai spīdēt koloīdu. Uzzīmējiet paraugu pipetā.
· Automātiskas pipetēšanas ierīces izmantošana.
· 10-200 MU 1 šķidruma kustības punktā var izmantot lielākajā daļā parauga punktu. Ļoti maziem paraugu caurumiem (mazāk nekā 10μ1) garā pipetes galva, ko izmanto secības līmei, ir ērtāka.

· Pipettings tikai iegremdēts paraugā, ieelpojot lēnām kustīgu šķidrumu. Paraugs var šķist lipīgs ar glicerīnu, un ātra sūknēšana var ievilkt gaisa burbuļus pipetes galvā.

· Paraugi pēc pipetes ieelpošanas galvas maigi pārvietos šķidruma galvu uz caurules malas vai noslaucot papīru, kas piesūc šķidrumu galvu ārpus pilienu. Esiet piesardzīgs, lai nepieredzētu paraugu.

Ievietojiet paraugu parauga caurumā

· Pipetēšanas ierīce Lai saglabātu nelielu spiedienu, padariet paraugus nedaudz pārplūdušas šķidruma galvas.
· Buferā ievietotā pipetes galva, kas ir nedaudz augstāka par plankumu caurumiem, saglabā pozitīvu spiedienu. Pipetes galu var ievietot nelielā caurumā.
· Lēnām un vienmērīgi paraugi ārā. Pipetes galu novieto virs punkta parauga cauruma, un paraugs nogrims caurumā. Ļaujiet paraugam izlietnei, lai aizpildītu parauga caurumu, nevis iespiestu.
· Kad pēdējais parauga piliens ar šķidru galvu, šķidrums pārvietosies uz otro kāju, lēnām paceļ šķidruma kustību, pārvietojas no bufera

Kā veikt vertikālu līmes paraugu ņemšanu?

· Vertikālā līmes punkta parauga caurumi, kas veidojas starp diviem stikla gabaliem. Ļoti plānā līmē pipetes galvu pat nevar ievietot starp divām stikla plāksnēm. Skatieties glicerīnu! Ielieciet pipetes galvu virs parauga cauruma, un paraugs nogrims caurumā.
· Punkta paraugs pirms tam noteikti ievietojiet polipropilēna acilgēla parauga cauruma vertikālo punktu tīru. Nomazgājiet neolimerizēto akrilamīdu un ūdeni, kas var parādīties parauga cauruma apakšā. Ūdens var padarīt parauga caurumu ievērojami mazāku. Izmantojiet 25 ml vai 50 ml šļirci un 18 gabarītu adatu. Ielejiet elektroforēzes buferšķīdumu un uzmanīgi izskalojiet parauga caurumu.
· Var būt grūti redzēt parauga caurumu, bet tajā pašā pārējā laikā ir viegli. Ja ir lieki caurumi, parauga buferi var pārbaudīt ar bromofenola zilu.